近有很多科研朋友們，在上留言，說(shuō)ELISA試劑盒實(shí)驗一直進(jìn)行不下去了，那到底是什么原因導致的呢？關(guān)注上海恒遠生物，讓您zui快了解到科研資訊及科研實(shí)驗中那些有趣的事，今天我給大家帶來(lái)了ELISA試劑盒實(shí)驗核心步驟，不知能否得到您的臨幸呢？
在實(shí)驗時(shí)，溫度尤為重要
血清標本宜在新鮮時(shí)檢測，嚴重溶血標本禁用。一般說(shuō)來(lái)，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，標本在冰箱中保存時(shí)間過(guò)長(cháng)導致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深。超過(guò)一周測定的需－20℃保存。在建立ELISA方法作反應動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達。為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，反應板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。應注意溫育的溫度和時(shí)間應按規定力求準確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成，采用水浴會(huì )造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應，邊上的值會(huì )偏高，建議為了客觀(guān)的判斷結果，將質(zhì)控放在非邊緣位置。
相關(guān)技術(shù)指導
通常采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA），在選擇抗體上，選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對；若選擇兩個(gè)單抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。ELISA實(shí)驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實(shí)驗中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書(shū)常規提供的范圍進(jìn)行操作。標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說(shuō)明書(shū)，注意每批的細節。在使用細胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說(shuō)明書(shū)中的細節，將凍干的細胞因子復溶。
基因工程抗原與合成肽抗原的區別
基因工程抗原是抗原基因在質(zhì)粒載體中原核或真核表達的蛋白質(zhì)抗原，多以大腸桿菌或酵母菌為表達系統。該類(lèi)抗原與合成肽相比，分子量大。合成肽采用化學(xué)方法制備，由于工藝的局限，合成數量有限，只能達到數百個(gè)氨基酸；而利用基因工程制備的抗原，分子量更大。
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